顯微鏡的正確調試和使用
在了解了顯微鏡各主要部件的名稱、構造和功能之后，為了更好地發(fā)揮顯微鏡的各種功能，提高工作效率，保證在顯微觀察及顯微照像過程中取得最佳效果，使用人員必須了解和掌握顯微鏡正確的調試方法和使用方法。尤其在新一代顯微鏡中，具備了多種功能，能進行多種顯微鏡檢方法觀察，正確的試調方法和使用方法就顯得尤為重要。下面以Axioplan萬能研究顯微鏡為例，簡述調試及使用方法。
1. 顯微鏡照明光路系統(tǒng)的調整 為了使顯微鏡的視野能受到均勻而又充分的照明，在顯微鏡初次安裝和調試時，就必須把照明光路系統(tǒng)調整好，這是正確使用顯微鏡，并獲得正確、可靠結果的重要手段和最基本的要求。此外，正確掌握照明光路系統(tǒng)的調整，是使用顯微鏡過程中更換光源燈泡后所必經(jīng)的步驟，也是在日常使用過程中不時地檢驗顯微鏡性能的必要手段。顯微鏡照明光路系統(tǒng)的調整主要有以下4項內容：
(1) 照明光源燈室在顯微外的初步調整
?、?首先將燈室的外殼打開，壓彈簧夾子將鹵素燈泡裝入插座中，安裝時避免手指直接接觸燈泡（可用柔軟的布或紙隔住），以免燈泡上留有指紋等臟物，影響燈泡的使用壽命。
?、?把燈室擺在桌面上，接通電源后，用專用的螺絲刀調節(jié)燈的調焦旋鈕孔（標有“←→”），使燈絲投影在1-2m外的墻上，將燈絲成像調至清晰；然后調節(jié)燈的高低位置調節(jié)絲孔（標有“──”），使燈絲位置高低適當；再調節(jié)燈的左右位置調節(jié)螺絲孔（標有“──”），使燈絲左右位置合適。
(2) 光源發(fā)光體（燈絲）在顯微鏡內位置的檢驗和校正 目的是為了把發(fā)光體的像端端正正地調入物鏡的視域范圍內，從光源的角度去確保顯微鏡的視域受到充分而均勻的照明，這是調整庫勒照明系統(tǒng)的前提條件。
需要的基本工具：對中望遠鏡購置顯微鏡時已配備。
① 拔掉燈庫內的毛玻璃套筒，把燈室裝回顯微鏡上；
② 選用10×物鏡，開亮光源程序找樣品并調焦清晰，再換用40×物鏡把樣品調焦清晰（40×物鏡可以看清燈絲的全貌）；
?、?把聚光鏡的孔徑光闌和視場光闌均開到最大；
④ 拔掉其中一個目鏡，換上對中望遠鏡，抓住白色部分，另一手伸縮黑色接目鏡，就可在視野中看到燈絲像；
⑤ 如燈絲位置不合適，調“──”孔，把燈絲像沿水平方向調好，調“──”孔，把絲像沿垂直方向調好，直至將燈絲像調至剛好充滿物鏡孔徑的光圓像；
⑥ 調整完畢后，將毛玻璃套筒插回原位，拔掉對中望遠鏡，換回目鏡作下一步調整。
以上所述照明光源燈室在顯微鏡外的調整和光源發(fā)光體在顯微鏡內位置的校驗，只需在顯微鏡初次安裝調試及更換燈泡時進行，平時使用顯微鏡時不能隨意亂調亂動。萬一調亂時，可按上述步驟調回原狀。#p#分頁標題#e#
(3) 庫勒照明（Kohler）系統(tǒng)的正確調整 顯微鏡的正確調試，主要工作之一是照明光路系統(tǒng)的調整，而其中的關鍵是庫勒照明系統(tǒng)的調整。對于每一位使用顯微鏡的人員，特別是作顯微照像的人員來說，應該對庫勒照明系統(tǒng)的原理及其調整步驟有一定的了解和掌握，才能充分發(fā)揮顯微鏡應有的功能，拍出來的照片才能在效果上比較一致而又完善。
庫勒照明系統(tǒng)的原理簡單來說就是：光源發(fā)光體上任意一點發(fā)出的光，可以照明顯微鏡的視域范圍，而光源發(fā)光體上每一點所發(fā)出的光匯集起來，在顯微鏡的視域中就實現(xiàn)了非常充分而又均勻的照明。
調整庫勒照明系統(tǒng)的目的，是為了使所觀察的視域能獲得均勻而又充分的照明，防止雜散光對照像系統(tǒng)造成影響或干擾，以免照像時在底片形成灰霧。
高調整庫勒照明系統(tǒng)的必要部件：視場光闌、可進行合軸調整的聚光鏡系統(tǒng)。
?、?選用10×物鏡和10×目鏡；
?、?把聚光鏡前端透鏡擺進光路中，孔徑光闌調至適中的位置上（不大不?。侔丫酃忡R升到最頂?shù)奈恢蒙?，聚光鏡轉盤調至明視野“J”位置；
?、?把視場光闌調至最?。?.1）；
?、?載物臺上放上已封片的生物樣品，開亮光源，調焦清晰；
?、?視域中會出現(xiàn)一個局部照明的區(qū)域或亮斑，這是視場光闌的模糊像，在其中可以清晰地看到樣品的細節(jié)；在它之外是較暗的視域，不一定能把樣品的細節(jié)看得清楚；
?、?把聚光鏡微微地向下調，使視野中的亮斑逐漸收小，慢慢變成一個清晰的多邊形象，這便是視場光闌的清晰像；
?、?一般情況下，多邊形象并不在視域中央，需要調整聚光鏡的一對調中螺絲，把視場光闌多邊形的像調至中央位置；
⑧ 逐漸開大視場光闌，使多邊形象成為視域的內接多邊形，進一步核對調中的狀況，如對中不夠理想，繼續(xù)微微調對中螺絲；
⑨ 將視場光闌稍為再微微開大一些，使它的多邊形象恰好消失在視域的邊緣上，至此，庫勒照明系統(tǒng)調整完畢。
庫勒照明系統(tǒng)調整好以后，整個視域照明均勻，拍攝的顯微照片明亮清晰，反差正常。在日后使用過程中應特別注意：
a. 視場光闌不可任意開大，但可隨物鏡倍數(shù)的增大而將視場光闌收小，隨物鏡倍數(shù)的減小而開大；
b. 聚光鏡的高低位置不準亂調，否則會破壞已調整好的庫勒照明系統(tǒng)；#p#分頁標題#e#
c. 使用10×以下物鏡時要將聚光鏡前端透鏡擺出光路外，使用10×或10×以上物鏡時要將前端透鏡擺入光路中；
d. 關于物鏡倍數(shù)與視場光闌大小配合問題，在實際使用過程中，作為一般觀察不一定要收小或開大視場光闌，但作顯微照相時，為了避免雜散光線對照相系統(tǒng)的干擾，以便能拍攝到較完善的照片，則應在使用每一個倍數(shù)的物鏡時，把視場光闌調節(jié)到正好消失于所觀察的視域邊上，這是比較繁復的工作，但又非做不可。較為簡便的方法是把與各個倍數(shù)物鏡相對應的視場光闌事先調整好，并作好記號，以后使用時根據(jù)記號直接調至相應的位置。
(4) 孔徑光闌的正確使用 由于聚光鏡的孔徑光闌可以影響顯微鏡的分辨率，使用時應掌握正確的使用方法。過去由于對孔徑光闌的認識不足，往往把它當作是調節(jié)視野亮度的工具。雖然調節(jié)孔徑光闌在一定程度上可以改變視野的亮度，但會直接影響成像的反差、對比度及分辨率，在使用過程中應盡可能避免。
為了發(fā)揮聚光鏡孔徑光闌的作用，以便在觀察時，尤其在作顯微照相時獲得最佳分辨率，在每換用一個倍數(shù)的物鏡時，在樣品調焦清晰后，需要調節(jié)孔徑光闌，使它的大小正好等于所用物鏡數(shù)值孔徑（物鏡孔徑像）的2/3 。
調整方法是用對中望遠鏡對焦于視野中黑色相差環(huán)上，調節(jié)孔徑光闌，可以看到一個多邊形的孔徑光闌像，然后調到等于物鏡孔徑像的2/3，即介于黑色相差環(huán)外與圓形視域內之間。為方便起見，可把與各倍數(shù)物鏡相對應的孔徑光闌預先調整好，并作好標記，以免每次使用都要重新調整。
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