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大多數(shù)使用標(biāo)準(zhǔn)逐層方法工作的傳統(tǒng)3D打印技術(shù)缺乏兩個(gè)重要特征：首先，它們需要所有打印元素之間的物理連接或使用支撐結(jié)構(gòu)來穩(wěn)定精密部件和懸垂物，這些部件和懸垂物必須在之后移除。因此，糾纏或串聯(lián)元素是不可能的，尤其是在使用水凝膠等軟材料時(shí)。傳統(tǒng)3D打印設(shè)置的第二個(gè)限制是它們不是真正的3D打印，因?yàn)镃AD模型經(jīng)歷了陰影-切片過程，是2D層的軸向堆疊（圖 1A）。這限制了可能的運(yùn)動路徑。此外，必須掃描3D模型的大部分邊界框以構(gòu)建結(jié)構(gòu)，盡管在該體積的很大一部分內(nèi)沒有打印任何內(nèi)容。由于生產(chǎn)時(shí)間隨著打印分辨率的三次方增加而增加，因此無法經(jīng)濟(jì)高效地實(shí)現(xiàn)以亞微米分辨率生產(chǎn)的大尺寸樣品。

德國維爾茨堡大學(xué)提出了一種新穎的方法，它克服了這兩個(gè)限制，并且能夠創(chuàng)建僅在拓?fù)渖匣ミB的真正 3D 結(jié)構(gòu)部件。即使是由軟水凝膠制成的小至1 μm的精細(xì)特征也可以實(shí)現(xiàn)并用作 3D 細(xì)胞支架。與耗時(shí)的逐層程序相比，自由形式3D打印允許通過沿任何XYZ軌跡移動來構(gòu)建任意形狀，而無需創(chuàng)建任何支撐結(jié)構(gòu)（圖 1B）。為了將通用且快速的自由形式3D打印程序擴(kuò)展到低粘性前體的軟水凝膠，作者開發(fā)了一種雙組分水凝膠組合物（圖 1E），當(dāng)與光引發(fā)劑混合時(shí)，會產(chǎn)生可光固化的樹脂。聚（乙二醇）二丙烯酸酯（PEG-DA，m w = 700 g mol-1）和玫瑰紅（RB）分別被選為光敏組分和光引發(fā)劑。RB由于其多功能特性（如抗菌活性）及其在光化學(xué)組織粘合和癌癥治療中的用途而引起了生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域的興趣。第二個(gè)水凝膠成分是高度細(xì)胞相容性的聚（2-惡唑啉）/聚（2-惡嗪）嵌段共聚物 (PMeOx-b-PnPrOzi，簡稱：POx-b-POzi)，溫度升高，其經(jīng)歷可逆的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變。溫度低時(shí)，它是液體，很容易與其他成分混合。作為室溫下的凝膠，它允許創(chuàng)建獨(dú)立元件而無需支撐結(jié)構(gòu)。重要的是要注意，POx-b- POzi凝膠僅進(jìn)行物理交聯(lián)，并且在自由形式3D打印過程（圖 1F）后容易與未固化的PEG-DA（溶膠部分）一起被沖走，從而形成所需的3D結(jié)構(gòu)（圖. 1G）。

圖 1. (A) 使用耗時(shí)的逐層程序?qū)?3D 結(jié)構(gòu)進(jìn)行剖面圖和切片組裝。(B) 三維自由曲面構(gòu)造過程中激光焦點(diǎn)的軌跡，適用于抑制印刷元素?cái)U(kuò)散的高粘度聚合物 (C)，但在低粘度材料 (D) 中構(gòu)造時(shí)會導(dǎo)致不連續(xù)的部分環(huán)由箭頭突出顯示。（E-G）雙組分水凝膠的組分和聚合過程，通過freeform 2PP，然后是溶解水凝膠的所有非發(fā)光部分，包括固有支持基質(zhì)的顯影步驟。(H) 直徑為 15 μm 的互連環(huán)的共聚焦熒光顯微鏡圖像。(I) 具有三層的相同環(huán)形結(jié)構(gòu)的頂視圖和 (J) 側(cè)視圖。

圖2 (A) 不同水凝膠組合物的振幅掃描：POx-b-POzi(B1)、PEG-DA/ POx-b-POzi混合物 (B2) 和PEG-DA (B3)。(C) 主要成分PEG-DA和POx-b-POzi以及制備的水凝膠混合物 (PEG-DA/ POx-b-POzi) 和 2PP 結(jié)構(gòu)化和開發(fā)后 (2PP)的拉曼光譜的比較。(D) 具有 33 mW 恒定激光功率和從 0.25 mm s-1增加到 2.25 mm s-1的 2PP 結(jié)構(gòu)圓柱體的拉曼光譜。(E) 聚合物和水的擬合拉曼帶的面積比取決于結(jié)構(gòu)化激光功率 (紅色) 和速度 (藍(lán)色)。 (F) 2PP 結(jié)構(gòu)圓柱的楊氏模量取決于結(jié)構(gòu)速度。

圖 3 不同 2PP 結(jié)構(gòu) 3D 設(shè)計(jì)的共聚焦熒光顯微鏡圖像。(A) 確定 2PP 處理窗口以實(shí)現(xiàn) 3D 松散互連環(huán)（串聯(lián)環(huán)配置）。(A1) 激光劑量太高，(A2) 根據(jù)需要，(A3) 中等結(jié)構(gòu)質(zhì)量，(A4) 激光劑量太低。(B) 研究的速度和激光功率組合矩陣及其分類到所描述的類別中。一層焊接 (C) 和串聯(lián) (D) 環(huán)自由懸掛在支撐結(jié)構(gòu)內(nèi)。(E) 由四個(gè)串聯(lián)環(huán)層組成的 1 × 1 mm 場的一部分。(F) 一層各向異性互連環(huán)（焊接和串聯(lián)環(huán)配置，取決于空間方向）。

圖 4 (A)L929細(xì)胞增殖，在播種后24小時(shí)至6天期間在上方培養(yǎng)，在翻轉(zhuǎn)底物前參考細(xì)胞計(jì)數(shù)。L929細(xì)胞在焊接(B)和連接環(huán)設(shè)計(jì)(C)中的3D水凝膠支架內(nèi)遷移的熒光共聚焦顯微鏡圖像的頂視圖。插圖顯示了與水凝膠環(huán)相互作用的細(xì)胞的3D特寫。(D)IPSC衍生的心肌細(xì)胞聚集體，在播種7天后在由串聯(lián)環(huán)制成的四層支架頂部培養(yǎng)。(E)在播種后第4天，在由焊接環(huán)制成的四層環(huán)形支架上分離的心肌細(xì)胞聚集體中的兩個(gè)細(xì)胞。

相關(guān)論文以題為Freeform direct laser writing of versatile topological 3D scaffolds enabled by intrinsic support hydrogel發(fā)表在《Mater. Horiz.》上。通訊作者是德國維爾茨堡大學(xué)Doris Heinrich、Robert Luxenhofer。

參考文獻(xiàn)：

doi.org/10.1039/D1MH00925G