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技術(shù)前沿

中國(guó)科學(xué)院理化所在飛秒激光無(wú)掩膜光刻拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)及細(xì)胞球浸潤(rùn)機(jī)制方面取得新進(jìn)展

來(lái)源:中國(guó)科學(xué)院理化技術(shù)研究所2023-05-08 我要評(píng)論(0 )   

隨著組織工程領(lǐng)域的發(fā)展,生物材料界面與細(xì)胞的相互作用及物理機(jī)制成為了研究熱點(diǎn)之一。生物界面的拓?fù)湫蚊部梢杂行д{(diào)控細(xì)胞行為并影響細(xì)胞功能。然而體內(nèi)的一些生理過(guò)...

隨著組織工程領(lǐng)域的發(fā)展,生物材料界面與細(xì)胞的相互作用及物理機(jī)制成為了研究熱點(diǎn)之一。生物界面的拓?fù)湫蚊部梢杂行д{(diào)控細(xì)胞行為并影響細(xì)胞功能。然而體內(nèi)的一些生理過(guò)程,如胚胎發(fā)育、免疫應(yīng)答和組織更新與重塑等往往涉及多細(xì)胞的集體行為。腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移也與集體細(xì)胞的協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)有關(guān)。細(xì)胞球作為一種體外三維細(xì)胞培養(yǎng)模型,具有強(qiáng)烈的細(xì)胞-細(xì)胞相互作用,可以在細(xì)胞生理學(xué)、信號(hào)通路、基因和蛋白表達(dá)以及氣體/營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)梯度等方面更好地模擬體內(nèi)環(huán)境。因此,明確材料表面拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)與細(xì)胞球的相互作用對(duì)理解體內(nèi)生理、病理機(jī)制具有重要意義。但是,目前同時(shí)具有厘米級(jí)尺度和微納米精度的跨尺度微納拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)尚難以快速制備。

中科院理化所仿生智能界面科學(xué)中心有機(jī)納米光子學(xué)實(shí)驗(yàn)室鄭美玲研究員團(tuán)隊(duì)近日在跨尺度微納拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)制備及細(xì)胞球浸潤(rùn)性調(diào)控方面取得了新進(jìn)展。該團(tuán)隊(duì)提出采用飛秒激光無(wú)掩膜投影光刻技術(shù)(MOPL)制備大面積兼具高精度的微盤陣列拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)以研究細(xì)胞球的浸潤(rùn)性。研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞球在多種不同單元直徑的微盤陣列拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)上展示出了不同的浸潤(rùn)速度。通過(guò)分析細(xì)胞形態(tài)、骨架分布和細(xì)胞黏附,解析了細(xì)胞球浸潤(rùn)速度的變化機(jī)制,并發(fā)現(xiàn)細(xì)胞球在大尺寸和小尺寸的微盤結(jié)構(gòu)單元上采取不同的浸潤(rùn)模式。該研究揭示了細(xì)胞球?qū)绯叨任⒓{拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的響應(yīng)機(jī)制,為理解組織浸潤(rùn)行為提供了參考。研究成果發(fā)表于Small 2023, 2300311. (DOI: 10.1002/smll.202300311),博士研究生郭敏為論文第一作者,鄭美玲研究員為通訊作者。

MOPL是一種高效率且能靈活化地制備微納拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的技術(shù)。考慮到單個(gè)細(xì)胞的尺寸以及細(xì)胞球浸潤(rùn)過(guò)程中與大面積拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的相互作用,作者首先利用MOPL技術(shù)制備了高度低于1μm,拓?fù)鋯卧睆椒謩e為2、5、20和50 μm的大面積(8 mm × 10 mm)微盤陣列結(jié)構(gòu)(圖1)。

理化所在飛秒激光無(wú)掩膜光刻拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)及細(xì)胞球浸潤(rùn)機(jī)制方面取得新進(jìn)展

圖1.飛秒激光無(wú)掩膜投影光刻示意圖及制備的微盤陣列拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)

采用超低吸附法制備了大小均一的人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞的細(xì)胞球。然后利用激光掃描共聚焦熒光顯微鏡對(duì)細(xì)胞球在微盤陣列拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)上的動(dòng)態(tài)浸潤(rùn)行為進(jìn)行了觀察。細(xì)胞球在一系列微盤陣列拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)上發(fā)生了完全浸潤(rùn)并展現(xiàn)出不同的浸潤(rùn)面積。結(jié)合細(xì)胞球鋪展理論,通過(guò)量化不同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞球浸潤(rùn)面積,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞球的浸潤(rùn)速度在2、5、50和20 μm直徑的微盤結(jié)構(gòu)單元上依次減小,細(xì)胞球在直徑為20 μm的微盤結(jié)構(gòu)單元上具有較小的細(xì)胞-基底黏附能(圖2)。

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圖2. 細(xì)胞球在多種拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)上的動(dòng)態(tài)浸潤(rùn)過(guò)程與分析

進(jìn)一步地,利用免疫熒光染色分析了多種不同微盤結(jié)構(gòu)上的細(xì)胞形態(tài)、肌動(dòng)蛋白和黏著斑分布,提出細(xì)胞球在直徑2μm和5 μm的小尺寸的微盤結(jié)構(gòu)上采取攀爬模式浸潤(rùn),在直徑20μm和50 μm的較大尺寸的微盤結(jié)構(gòu)上采取繞行模式浸潤(rùn)(圖3)。細(xì)胞球的浸潤(rùn)過(guò)程表現(xiàn)為一種多細(xì)胞的集體協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)。

理化所在飛秒激光無(wú)掩膜光刻拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)及細(xì)胞球浸潤(rùn)機(jī)制方面取得新進(jìn)展

圖3.細(xì)胞球的攀爬浸潤(rùn)和繞行浸潤(rùn)模式解析

該研究揭示了細(xì)胞球在各向同性微盤陣列拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)表面的浸潤(rùn)機(jī)制,促進(jìn)了對(duì)細(xì)胞球與界面拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)相互作用的理解。本工作是飛秒激光面投影納米光刻技術(shù)及應(yīng)用(Nano Lett. 2021,21, 3915-3921;Opt. Express 2022, 30, 36791-36801;Nano Lett. 2022, 2, 9823-9830)的拓展和深入。相關(guān)研究工作得到科技部納米科技重點(diǎn)專項(xiàng)、國(guó)家自然科學(xué)面上基金項(xiàng)目和中國(guó)科學(xué)院國(guó)際伙伴計(jì)劃等項(xiàng)目的大力支持。該課題研究過(guò)程中得到了仿生中心王樹濤副所長(zhǎng)的悉心指導(dǎo)。


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